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本试剂盒主要用于植物组织中的还原型维生素C(抗坏血酸)的检测，仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

在强酸和偏磷酸根离子存在条件下，钼酸铵能与还原型维生素C反应生成蓝色化合物，在一定浓度范围吸光度值与浓度呈线性关系，以酶标仪760nm处检测吸光度，获得Vitamin C含量。

• 反应迅速；
  
• 操作简便；
  
• 还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，专一性好。

维生素C(Vitamin C)又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内维生素C是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。VC有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。

组分		规格	保存条件
试剂(A):Vitamin C标准(250μg/mL)		1mL	4℃避光
试剂(B):组 织匀浆液	试剂(B1):组织匀浆液A	100mL	RT
	试剂(B2):组织匀浆液B	12mL	RT
试剂(C):MPA		0.2g	RT
试剂(D):酸性缓冲液Ⅰ		5mL	RT
试剂(E):酸性缓冲液Ⅱ		10mL	RT
试剂(F):钼酸铵		0.5g	RT

保存：4℃，避光，有效期6个月。

• 蒸馏水
  
• 电子天平、研磨器或匀浆器
  
• 离心机、离心管或试管
  
• 水浴锅或恒温箱
  
• 酶标仪、96孔板

• Vitamin C标准避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 组织匀浆液A保存温度过低时易产生结晶，可用温水浴溶解后再使用。
  
• Vitamin C Assay buffer室温保存时间过长或者过期会出现白色粘稠物，不可使用，应换新的产品使用。不使用时建议4℃保存。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

• 配制组织匀浆液：按组织匀浆液A:组织匀浆液B:蒸馏水=8:1:91的比例混匀即得。
  
• 准备样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量1g，加入研磨器内，再加入少量组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用组织匀浆液研磨，最后一并倒入10mL离心管，补充组织匀浆液至10mL，充分混匀，4000r/min离心5min，取0.05mL上清液，加入等量蒸馏水，即为待测液。
  
• 配制MPA工作液：称取0.3g MPA粉末，充分溶解于10mL酸性缓冲液Ⅰ中，也可根据使用情况称取一定量的MPA按比例溶解即可，4℃保存3～4天有效。
  
• 配制Vitamin C Assay buffer：取钼酸铵粉末0.5g，充分溶解于10mL蒸馏水中，也可根据使用情况称取一定量的钼酸铵加水按比例溶解即可，4℃避光保存。注意：钼酸铵溶于水会逐渐变化成乳白色浊液，则不能使用。
  
• 配制系列Vitamin C标准：取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。
  

  加入物(μl)	1	2	3	4	5	6	7
  Vitamin C标准(250μg/mL)	20	30	40	50	60	80	100
  蒸馏水	80	70	60	50	40	20	0
  相当于Vitamin C浓度(μg/ml)	50	75	100	125	150	200	250

  
  
• Vitamin C加样：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，
  并注意避免产生气泡。如果样品中的Vitamin C含量过高，可以减少样品用量或适当稀
  释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
  

  加入物(μl)	空白孔	标准孔	测定孔
  蒸馏水	40	－	－
  系列Vitamin C标准(1～7号)	－	40	－
  待测液	－	－	40
  1×组织匀浆液	80	80	80
  MPA工作液	20	20	20
  酸性缓冲液Ⅱ	40	40	40
  Vitamin C Assay buffer	80	80	80

  
  
• Vitamin C测定：立即混匀，30℃水浴20min，空白调零，以酶标仪测定760nm处系列标准孔、测定孔的吸光度。

以系列标准Vitamin C (50、75、100、125、150、200、250μg/mL)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程，以测定孔的吸光度代入回归方程求得样品维生素C含量。
100g样品中维生素C含量(mg) =(c0×V1)×100/(m1×1000)=(c0×V1)/(m1×10)
c0：待测样品的吸光度值在标准曲线上查出的维生素C的浓度(μg/ml)
V1：待测液的总体积(ml)
m1：样品质量(g)
1000：μg换算成mg


标准曲线制作：在室温条件下按说明书操作，用分光光度计对系列标准进行吸光度的测定，其标准曲线如下(仅供参考)：

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